miR-96-5p靶向叉头状转录因子O1对Ishikawa细胞的作用

摘要

【目的】探讨微小RNA(miR)-96-5p通过靶向叉头状转录因子O1(FOXO1)基因对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的影响。【方法】qRT-PCR检测正常组织和子宫内膜癌组织中miR-96-5p和FOXO1 mRNA的表达,West⁃ern blot法检测FOXO1蛋白表达。分析miR-96-5p及FOXO1表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系。转染pcD⁃NA、pcDNA-FOXO1、inhibitor NC、miR-96-5p inhibitor、miR-96-5p mimic、miR-96-5p+FOXO1到子宫内膜癌Ishi⁃kawa细胞,分别记为pcDNA组、FOXO1组、inhibitor NC组、miR-96-5p inhibitor组、miR-96-5p组、miR-96-5p+FOXO1组,对照组不进行转染。取稳定转染的各组细胞,CCK-8和Transwell小室检测细胞活力和侵袭能力,West⁃ern blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化多聚ADP核糖聚合酶(cleaved PARP)、p21及波形蛋白的表达水平。TargetScan网站预测miR-96-5p与FOXO1的靶向关系,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。Ishikawa细胞分为mimic NC组、miR-96-5p组、inhibitor NC组、miR-96-5p inhibitor组,qRT-PCR检测各转染组miR-96-5p和FOXO1 mRNA的表达,Western blot法检测FOXO1蛋白表达。【结果】子宫内膜癌组织中miR-96-5p的相对表达量较正常组织上调,相反,FOXO1 mRNA和蛋白相对表达量下调(P<0.01)。子宫内膜癌患者中miR-96-5p高表达与病理分级和临床分期呈正相关(P=0.034,P=0.010),与年龄和是否绝经无明显相关性(P=0.370,P=0.166);FOXO1低表达与病理分级和临床分期呈负相关(P=0.023,P=0.007),与年龄和是否绝经无明显相关性(P=0.344,P=0.144)。过表达FOXO1或抑制miR-96-5p表达后,Ishikawa细胞活力明显降低(P<0.05)、侵袭细胞数减少(P<0.01),cyclin D1、Vimentin蛋白表达水平明显降低,而cleaved PARP、p21蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,miR-96-5p组Ishikawa细胞活力明显升高(P<0.05)、侵袭细胞数增加(P<0.01),Cyclin D1、Vimentin蛋白表达水平明显升高,而cleaved PARP、p21蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与miR-96-5p组比较,过表达FOXO1可明显逆转miR-96-5p对Ishikawa细胞活力和侵袭的促进作用(P<0.05)。miR-96-5p靶向并负调控FOXO1的表达(P<0.05)。【结论】miR-96-5p可通过靶向负调控FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭。