E2F转录因子2对多发性骨髓瘤细胞粘附的影响

摘要

【目的】结合生物信息学途径和细胞分子实验,探讨E2F转录因子2(E2F2)对多发性骨髓瘤细胞粘附的影响。【方法】首先,利用临床样本和GEO数据库分析E2F2在骨髓瘤中的表达水平与患者的预后关系。其次,从敲低E2F2的骨髓瘤细胞系MM.1S的RNA-seq数据中筛选差异基因,并进行GO功能富集和KEGG信号通路分析,同时,利用string网站进行蛋白互作网络分析。构建稳定敲低E2F2的骨髓瘤细胞系MM.1S,并经蛋白印迹法(West⁃ernBlot)和荧光定量PCR(qRT-PCR)检测E2F2的表达水平。通过细胞粘附实验检测稳定敲低E2F2对骨髓瘤细胞粘附的影响,利用qRT-PCR检测稳定敲低E2F2后细胞粘附相关基因的表达变化。通过细胞迁移实验检测稳定敲低E2F2对骨髓瘤细胞迁移的影响。【结果】我们在骨髓瘤患者的临床样本中观察到E2F2的表达显著升高,GEO数据库结果显示E2F2在骨髓瘤中高表达提示患者预后不良。分析RNA-Seq数据获得815个共同差异基因,其中508个基因上调表达,307个基因下调表达,这些差异基因与细胞粘附和血管生成等功能密切相关。经WesternBlot和qRT-PCR验证,成功构建稳定敲低E2F2的MM.1S细胞系。敲低E2F2显著增加MM.1S细胞的粘附水平和升高FN1、PECAM1、ICOSLG等细胞粘附相关基因的表达,同时减弱MM.1S细胞迁移侵袭的能力,P值均<0.05。【结论】通过对RNA-seq数据的生物信息学分析,我们发现转录因子E2F2与骨髓瘤的细胞粘附密切相关,在骨髓瘤MM.1S细胞系中敲低E2F2能促进细胞粘附相关基因的表达和增加细胞粘附水平,并抑制细胞迁移能力。