接骨草蔗糖酶同工酶的分离纯化及其部分性质研究

摘要

从接骨草幼叶中提取的蔗糖酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、SephacrylS-200 凝胶过滤层析纯化,得到3种同工酶．对3种同工酶进行SDS-PAGE和IEF电泳均显示一条蛋白带,其亚基分子量分别为45．8 KD,44．3 KD,43．2 KD;等电点分别为pH 4．0,pH 3．8,pH 3．75．凝胶过滤测得3种同工酶全酶分子量分别为91．2 KD,89．1 KD,87．4 KD,表明3种同工酶均由2个相同亚基组成,其表观Km分别为30 mmol／L, 57．1 mmol／L,65 mmol／L;Vmax分别为98μg／min,48 μg／min,35μg／min．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅲ在pH4．4-5．0 时有最大活性,同工酶Ⅱ则在pH3．9-4．2时有最大活性．3种同工酶均在pH3-6范围内比较稳定．同工酶Ⅰ和同工酶Ⅱ在48-52℃有最大活性,同工酶Ⅲ在50-55℃有最大活性．3种同工酶均在50℃以下有较好的稳定性．