橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定

摘要

【目的】克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1（PHEV2.1）,构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因（Hb HMGR1）的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法】根据已报道的HEV2.1序列（Gen Bank登录号AY247789.1）设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7-33-97基因组DNA中克隆PHEV2.1,与Hb HMGR1基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定。【结果】用特异引物可从热研7-33-97基因组DNA中扩增获得1852 bp的PHEV2.1片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6%。将PHEV2.1与Hb HMGR1基因融合构建乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功。【结论】将PHEV2.1和Hb HMGR1基因先构建到p CAMBIA3301载体上再克隆至p CAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至p CAMBIA2301载体上出现Pst I突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1。