Box-Behnken设计—响应面法优化地参总三萜酸纯化工艺

摘要

【目的】建立响应面模型优化合适树脂下地参总三萜酸的纯化工艺,为研究地参总三萜酸活性提供技术参考。【方法】运用Box-Behnken设计方法,采用大孔树脂吸附纯化地参总三萜酸,以吸附率和解吸率为指标,测定5种大孔树脂(AB-8、D101、HPD600、DA201和S-8型)对地参总三萜酸的纯化效果。以上样浓度、上样流速、洗脱浓度和洗脱流速为自变量,回收率为因变量,运用响应面法优化地参总三萜酸纯化工艺参数。【结果】最佳显色条件:显色温度60℃,5%香草醛—冰乙酸0.2 mL,高氯酸0.4 mL,检测波长545 nm。AB-8型树脂对地参总三萜酸的吸附和解吸效果最佳,解吸率为88.61%,吸附率为70.54%。上样体积在40 mL,80%乙醇100 mL为最佳洗脱体积。建立的回归方程:Y=0.6887+0.0196A-0.0085B-0.0287C+0.0052D+0.0299AB-0.0107AC-0.0122AD+0.0128BC+0.0211BD+0.026A2-0.0765B2-0.0877C2-0.0932D2(A为上样浓度,B为上样流速,C为洗脱浓度,D为洗脱流速,Y为总三萜酸回收率)。由Box-Behnken方差分析结果可得,上样浓度和洗脱浓度2个因素,以及上样浓度与上样流速的交互作用、洗脱浓度与洗脱流速的交互作用对地参总三萜酸回收率影响极显著(P上样浓度>上样流速>洗脱流速。优化后的地参总三萜酸纯化工艺:上样浓度0.66 mg/mL、上样流速2 BV/h、洗脱浓度80%、洗脱流速2 BV/h,在此条件下,总三萜酸平均回收率为67.37%。【结论】建立的回归模型可用于地参总三萜酸纯化工艺的预测;AB-8型大孔树脂对地参总三萜酸的分离纯化效果较好,适用于总三萜酸物质的纯化。