几丁质酶表达载体的构建及在类产碱假单胞菌中的表达研究

摘要

作者利用类产碱假单胞菌(Pseudomonaspseudoalcaligenes)的强基因启动子PA7的部分片段LQZ,将环状芽孢杆菌(Bacilluscirculans)C 2中克隆的几丁质酶基因编码区序列片段CSP连接在LQZ启动子阅读框翻译起始位点atg之后,插入pBluescriptsk(-)成功构建P.pseudoalcaligenes表达载体pBPL1.用假单胞菌转化法转化,利用几丁质平板进行筛选,转化子pBPLC1在几丁质平板上能够产生水解圈,在P.pseudoalcaligenes中成功表达.同时对Tm值相差大的引物进行PCR扩增研究,发现添加5%～10%DMSO能提高引物与模板序列特异性复性,和扩增反应效率.