驴Zfy基因干扰载体的构建及验证

摘要

目的探讨干扰驴Z fy基因的体内外干扰效果。方法根据驴Zfy基因设计合成4段shRNA,并由独立的U6启动子启动,每两个shRNA片段串联组合成干扰载体,体外培养生精细胞检测干扰载体的干扰效率,筛选最佳的干扰载体用于体内验证干扰效果。结果结果显示:构建出2个驴Zfy基因双shRNA串联重组干扰载体CV250-1、CV250-2,细胞水平验证结果表明CV250-1的干扰效率为76.37%±6.36%,差异极显著(P<0.01);CV250-2的干扰效率为67.73%±4.94%,差异显著(P<0.05)。成功对CV250-1重组载体进行体内验证,经母体静脉血胎儿游离DNA性别鉴定得到胎儿雌性率为71.05%(P<0.05)。结论成功构建的驴Zfy基因重组载体CV250-1,可抑制种公驴睾丸组织Zfy基因的表达,细胞水平干扰效率为76.37%,体内试验胎儿雌性率为71.05%,差异显著(P<0.05)。