多头绒泡菌G_2期cDNA表达文库的构建

摘要

cDNA表达文库是分离、筛选基因的重要平台.为分离多头绒泡菌SC35类似蛋白PSCL32 5及其激酶的基因,首先检测多头绒泡菌PSCL32 5及其激酶在细胞周期不同时相的含量,发现PSCL32 5在G2期含量最高;再从多头绒泡菌G2期RNA出发,构建多头绒泡菌G2期cDNA表达文库.得到cDNA文库的初始滴度为1 22×106pfu/mL(pfu为噬菌体数目),cDNA扩增文库的滴度为1 12×1011pfu/mL,插入片段的重组率接近100%,插入片段的大小在0 5～2 5kb范围,说明所构建的cDNA文库质量较好.