沉默FOXC2基因对乳腺癌耐阿霉素MCF-7/ADR细胞耐药性的逆转作用及机制

摘要

目的探讨沉默FOXC2基因对乳腺癌耐阿霉素MCF-7/ADR细胞耐药性的逆转作用及机制。方法MCF-7/ADR细胞分为未转染组、control-shRNA组和FOXC2-shRNA组,RT-PCR检测三组细胞FOXC2 mRNA表达情况,Western blot检测三组细胞FOXC2蛋白表达情况。实验分为未转染组、空脂质体组、control-shRNA组及FOXC2-shRNA组,MTT法检测吡喃阿霉素(THP-ADM)作用下MCF-7/ADR细胞的增殖抑制率及半数致死浓度(IC;);流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布;Western blot检测FOXC2蛋白及乳腺癌耐药蛋白(BCRP)及EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达变化。结果与未转染组及control-shRNA组相比,FOXC2-shRNA组中FOXC2 mRNA及其蛋白表达明显降低(P<0.05)。MTT显示FOXC2-shRNA组细胞对THP-ADM化疗敏感性增加,IC;由(6.08±1.23)μg/ml降至(0.65±0.01)μg/ml(P<0.05);同时该组细胞早期凋亡率为(20.35±0.12)%,明显高于未转染组、空脂质体组及control-shRNA组(P<0.05),且S期及G0/G1期细胞比例减少及G2/M期细胞比例增多(P<0.05);Western blot结果显示FOXC2-shRNA组细胞FOXC2、BCRP及间质性标志物Vimentin蛋白表达下降(P<0.05),而上皮性标志物E-cadherin蛋白表达增加(P<0.05)。结论通过RNA干扰沉默FOXC2基因表达可以诱导MCF-7/ADR细胞发生凋亡,能有效逆转MCF-7/ADR细胞对THP-ADM的耐药性,其可能通过调控EMT机制发挥作用。