TNF-α刺激下长链非编码RNA H19对人牙周膜干细胞骨向分化的调控作用

摘要

目的研究TNF-α刺激下人牙周膜干细胞骨向分化过程中长链非编码RNA的表达情况,探索长链非编码RNA H19在其中发挥的功能。方法选用人牙周膜干细胞作为研究对象,采用流式细胞术检测人牙周膜细胞表面分子STRO-1、CD105、CD90、CD31、CD14、CD45的表达情况。实验分为正常对照组(正常培养液培养)和TNF-α处理组(含10 ng/ml TNF-α的培养液培养),并对两组细胞进行成骨诱导,7 d后碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞ALP表达的情况,real time PCR检测成骨相关基因Runx-2、OPN、ALP以及H19、TCF1 mRNA的表达情况。正常牙周膜细胞经过TNF-α处理后,实验分为对照组、空转组和转染组(转染慢病毒载体H19)。real time PCR检测H19转染效率以及转染后成骨相关基因Runx-2、OPN、ALP和TCF1 mRNA的水平。结果流式细胞仪检测结果显示:牙周膜干细胞表型分子STRO-1细胞百分比为34.3%,CD105细胞百分比为98.0%,CD90细胞百分比为98.0%,CD31细胞百分比为1.6%,CD14细胞百分比为2.4%,CD45细胞百分比为1.4%。牙周膜干细胞成骨诱导7 d后,TNF-α处理组较正常对照组碱性磷酸酶染色变浅。real time PCR检测结果表明,成骨诱导后TNF-α处理组Runx-2、OPN、ALP mRNA较正常对照组的表达降低(P<0.05),H19、TCF1的mRNA表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。慢病毒转染H19后,转染组H19 mRNA表达量明显较对照组和空转组升高,Runx-2、OPN、ALP、TCF1 mRNA表达量上调(P<0.05)。结论TNF-α可能通过影响H19的功能抑制人牙周膜干细胞的骨向分化。