子宫内膜癌细胞外泌体长链非编码RNA-C00473对人脐静脉内皮细胞VEGF和VEGFR-2表达的影响

摘要

目的 分析子宫内膜癌患者血清外泌体(exosome, Exo)中长链非编码RNA(lncRNA)C00473表达情况,及子宫内膜癌细胞(Ishikawa)外泌体对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell, HUVECs)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和血管内皮细胞生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)表达的影响。方法 选取在空军军医大学唐都医院手术治疗的15例子宫内膜癌患者为研究对象,同时选取15例子宫内膜正常患者作为对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组血清外泌体中lncRNA-C00473表达情况。将Ishikawa细胞分为过表达组(转染pcDNA3.1-C00473)、抑制组(转染siRNA-C00473)和空白组,并提取各组外泌体。透射电镜、蛋白免疫印迹(Western blot)、纳米颗粒跟踪分析技术(nanosight tracking analysis, NTA)鉴定外泌体粒径及浓度。体外培养HUVEC细胞并添加提取的外泌体,分为过表达Exo组(添加C00473过表达组血清Exo)、抑制Exo组(添加C00473抑制组血清Exo)和对照组(添加未转染组血清Exo)。qRT-PCR、Western blot检测各组HUVEC中VEGF、VEGFR-2表达情况。结果 与子宫内膜正常患者相比,子宫内膜癌患者血清外泌体中lncRNA-C00473的表达增高(P<0.05)。从各组Ishikawa细胞中提取的外泌体均具有较好的粒径及浓度、形态,并表达特征性蛋白CD63、CD9。与抑制Exo组相比,过表达Exo组HUVEC细胞中VEGF、VEGFR-2在mRNA和蛋白水平均增高(均P<0.05)。结论 lncRNA-C00473在子宫内膜癌患者血清外泌体中高表达,且过表达lncRNA-C00473的Ishikawa细胞来源外泌体能够促进HUVEC细胞中VEGF、VEGFR-2表达增高。