氯胺酮通过增强星形胶质细胞KAT6B基因表达提高抗氧化应激水平

摘要

目的 探讨氯胺酮提高星形胶质细胞抗氧化应激水平的作用及分子机制.方法 氯胺酮(50μmol/L)处理人星形胶质细胞(HA1800)后,分别使用比色法、WST-1法及钼酸胺法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力等氧化应激指标的改变.Western blot检测转录因子E2相关因子2(Nrf2)、蛋白组乙酰化和KAT6B蛋白水平.免疫荧光染色检测乙酰化水平和Nrf2在星形胶质细胞中的表达及定位.RT-PCR检测氯胺酮对KAT6B基因的mRNA和circRNA表达的影响.KAT6B基因siRNA转染沉默基因表达,复合氯胺酮处理,检测Nrf2、蛋白质乙酰化、GSH-Px、T-SOD和CAT水平.结果 50μmol/L氯胺酮处理12 h可显著提高HA1800细胞GSH-Px、T-SOD和CAT活力(P<0.05).50μmol/L氯胺酮处理3,6,12,24 h,HA800细胞内Nrf2、乙酰化和KAT6B的表达均明显增加(P<0.05),且以12 h最明显.免疫荧光结果显示,与0μmol/L比较,50μmol/L氯胺酮处理12 h,HA800细胞内乙酰化表达明显增加(P<0.05),且Nrf2蛋白向细胞核内转移.RT-PCR结果显示,50μmol/L氯胺酮处理HA1800细胞12 h,KAT6B mRNA的表达明显增加(P<0.05),KAT6B circRNA表达明显降低(P<0.05).siRNA沉默KAT6B实验结果发现,沉默KAT6B基因表达可显著抑制氯胺酮提高星形胶质细胞氧化应激水平的作用,显著降低KAT6B、Nrf2和乙酰化蛋白表达(P<0.05),以及T-SOD、CAT活力(P<0.05).结论 氯胺酮可通过降低circKAT6B水平、增强KAT6B基因表达、促进Nrf2激活进而提升星形胶质细胞抗氧化应激水平提高.