内质网应激对大鼠肝星状细胞HSC-T6活化的影响

摘要

cqvip:目的探索内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)作用对肝星状细胞活化的影响及可能机制。方法利用衣霉素(tunicamycin,Tun)对正常培养的大鼠肝星状细胞HSC-T6进行处理,处理浓度分别为0(空白对照组),0.1,0.5,1.0,2.0,4.0μg/ml。处理24 h,收集细胞,提取RNA和蛋白质,分别利用real-time PCR和Western blot检测内质网应激相关基因分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT增强子结合同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding homologous protein,CHOP),肝纤维化相关基因α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1A1),及TGF-β/Smad通路相关基因TGF-β1、Smad4在RNA转录或蛋白表达水平的变化。结果real-time PCR检测结果表明,与空白对照组相比,Tun处理能够显著上调内质网应激相关基因Grp78、CHOP的转录水平(P<0.01);肝纤维化相关基因α-SMA、TIMP1的转录水平在Tun浓度为2.0μg/ml最高,但Col1A1的转录水平在Tun处理后有所下降(P<0.01或P<0.05);TGF-β/Smad通路相关基因TGF-β1在Tun浓度为2.0μg/ml和4.0μg/ml显著上升(P<0.01或P<0.05)。Western blot检测表明,Tun处理后,与空白对照相比内质网应激相关基因Grp78、CHOP的蛋白水平显著升高(P<0.01或P<0.05);α-SMA的蛋白水平在Tun浓度为1.0μg/ml和2.0μg/ml时明显上调(P<0.01或P<0.05);TGF-β1/Smad通路相关基因Smad4在Tun处理后亦明显上调(P<0.01或P<0.05)。结论内质网应激可促进肝星状细胞的活化,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路相关。