LIM结构域蛋白FHL1C与GNB2不存在相互作用

摘要

目的 通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证经质谱技术获得的LIM结构域蛋白FHL1C相互作用候选分子GNB2与FHL1C之间是否存在相互作用,从而丰富FHL1C调控Notch信号通路的机制. 方法 分别构建融合质粒pCMV-GAL4-DBD-FHL1C和pCMV-VP16-GNB2,并将其共转染HeLa细胞,通过哺乳动物双杂交实验验证两者在细胞内是否具有相互作用;构建带Flag标签的GNB2融合蛋白的重组载体pCMV-Flag-GNB2,酶切鉴定正确后,与带myc标签的FHL1C融合蛋白的重组真核表达载体pCMV-myc-FHL1C共转染HeLa细胞,利用免疫共沉淀技术检测GNB2与FHL1C之间是否存在生理上的相互作用. 结果 哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验均显示:FHL1C与GNB2之间不存在生理上的相互作用. 结论 成功构建了实验所需的GNB2的融合蛋白真核表达重组载体,利用哺乳动物双杂交实验及免疫共沉淀技术证实FHL1C与GNB2之间不存在相互作用.