基于LCS探讨重组人TGF-β2对HTF细胞增殖及转分化的作用

摘要

目的基于活细胞工作站(LCS)探讨不同剂量重组人转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β2)对人Tenon’s囊成纤维细胞(HTF)增殖及转分化的作用及机制,为确定建立青光眼滤过术后HTF纤维化瘢痕细胞模型的最佳实验条件提供理论基础。方法培养原代HTF,分别用不同浓度TGF-β2(0,1,5,10,20,100 ng/ml)培养。CCK-8检测细胞活性。LCS分析不同浓度TGF-β2处理0,12,24,48,72 h时细胞增殖率。流式细胞术碘化丙啶染色检测细胞周期。Western blot检测细胞增殖指标增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白,细胞转分化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)蛋白的表达。结果1~100 ng/ml的TGF-β2对HTF无明显细胞毒性作用。相对于TGF-β2干预0,12,24,72 h时,TGF-β2干预48 h时促HTF增殖作用最为显著(P<0.05),因此采用TGF-β2干预HTF 48 h进行后续研究。与0 ng/ml的TGF-β2相比,5,10,20 ng/ml的TGF-β2干预促进HTF细胞转分化指标α-SMA、FN的表达(P<0.05)。与0 ng/ml的TGF-β2比较,5,10 ng/ml的TGF-β2干预促进HTF增殖(P<0.05),提高HTF增殖指标PCNA的表达(P<0.05),降低G0/G1期细胞的比例(P<0.05),增加S期细胞的比例(P<0.05)。结论LCS系统是研究TGF-β2对HTF细胞作用的有效方法。5~10 ng/ml的TGF-β2能有效促进HTF细胞转分化,通过促进细胞进入S期增加增殖期细胞的比例,进而促进HTF细胞增殖。推荐5~10 ng/ml的TGF-β2干预48 h建立HTF纤维化瘢痕细胞模型。