经静脉注射的单链9型腺相关病毒介导基因在星形胶质细胞表达

摘要

目的·探讨静脉注射含低氧反应元件(hypoxia-responsive element,HRE)启动子的单链9型腺相关病毒(single-stranded adeno-associated virus serotype 9,ssAAV9)能否介导LacZ基因在脑缺血区表达,及其可转染的脑细胞类型。方法·建立永久性左侧远端大脑中动脉闭塞(distal middle cerebral artery occlusion,dMCAO)小鼠模型,模型建立1 d和5 d后检测脑缺血区中低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)的表达。dMCAO模型建立1 h经颈静脉注射AAV9-H9LacZ载体,注射5 d后X-gal染色检测脑缺血区和肝组织中LacZ基因编码蛋白β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)的表达,免疫荧光双染色检测β-gal在星形胶质细胞、神经元及血管内皮细胞内的表达。结果·dMCAO模型建立1 d和5 d后小鼠缺血病灶局部HIF-1表达增高。β-gal主要在AAV9-H9LacZ注射小鼠的缺血半暗带区表达,其肝脏组织无β-gal阳性表达。脑缺血区β-gal主要与胶质细胞原纤维酸性蛋白共表达,少量β-gal与神经元特异核蛋白共表达。结论·经静脉注射的ssAAV9主要介导基因在脑缺血区星形胶质细胞表达。HRE能有效控制LacZ基因主要在脑缺血区表达。