白念珠菌ERG3基因敲除及其对耐药性的影响

摘要

目的·构建白念珠菌ERG3基因敲除株,分析ERG3敲除对白念珠菌唑类药物耐药性的影响及其常见耐药基因的表达。方法·使用融合PCR和同源重组技术,以白念珠菌SN152菌株基因组DNA、带有筛选标记的质粒DNA为模板构建敲除组件。采用醋酸锂转染法将敲除组件转染入SN152中,从而获得ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株。采用微量肉汤稀释法来判断SN152、ERG3^+/-和ERG3^-/-菌株对唑类药物的耐药性差异,同时使用实时荧光定量PCR检测菌株中的常见耐药基因。结果·获得白念珠菌ERG3敲除株。ERG3^-/-菌株对唑类药物的耐药性明显高于ERG3^+/-和SN152菌株。ERG3^-/-菌株的常见耐药基因(CDR1、CDR2、MDR1、ERG11)表达显著上升(均P<0.05)。结论·成功构建白念珠菌ERG3敲除株。ERG3基因的敲除提高了白念珠菌唑类药物的耐药性,且该基因表达下调的同时伴随其他耐药基因的表达上调。