单个细胞来源胎盘间充质干细胞培养方法的比较研究

摘要

目的·观察胚胎来源间充质干细胞(placental derived mesenchymal stem cells,PMSCs)在人血小板裂解液(human platelet lysate,HPL)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及传统的胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)不同组合的培养基中的倍增数目及细胞性状,着重探索更合适的PMSCs培养体系.方法·分离单个细胞来源PMSCs,扩增后分别用4种培养基孵育,分为FBS组、FBS+bFGF组、HPL组以及HPL+bFGF组.观察细胞形态及生长状态、细胞表型及多能分化.在P1、P2、P3、P4代进行计数.取P4代细胞接种,分析集落形成单位的个数.结果·经鉴定,PMSCs具有间充质干细胞的生物特性.数量上,FBS+bFGF组在P4代达到(1.12×107)个/cm2,HPL组达到(1.24×107)个/cm2 (P＞0.05),而FBS组和HPL+bFGF组则只有(5.58×106)个/cm2和(8.56×106)个/cm2.细胞形态上,FBS+bFGF组与HPL组P4代的PMSCs均保持贴壁生长,但HPL组细胞于P5代无法贴壁生长.细胞集落数量上,P4代时,FBS+bFGF组为51个/孔,HPL为52个/孔(P＞0.05).细胞生物学特性上,FBS+bFGF组和HPL组在P4代时均能基本保有间充质干细胞的特性和多能分化的能力.结论·从细胞数量上来看,HPL组中的P4代细胞数与目前常用的FBS+bFGF培养基没有显著差异,且已达到临床治疗剂量需求;从细胞生物学特性上来看,HPL培养基与FBS+bFGF培养基均能基本保持PMSCs细胞特性和多能分化的能力.但由于HPL培养基免疫原性低,因此更适合临床移植应用.然而,由于HPL培养基无法维持PMSCs生长至5代以后,故无法用于大规模细胞扩增.HPL+bFGF在目前实验条件下并不具备优势.