海带孢子体DNA随机扩增反应条件优化

摘要

从海带抱子体的酶解单细胞中提取的基因组ＤＮＡ，可用于随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）的重复性研究。通过对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验，确定优化反应体系为：０．２μｍｏｌ／Ｌ引物，１．５ｍｍｏｌ／Ｌｍｇ，１００μｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ，１.０　Ｕ Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶，３０ｎｇ模板 ＤＮＡ；优化反应程序为：９４℃变性２ｍｉｎ，接着 ４５个循环包括９４℃变性１ｍｉｎ，３７℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸２ｍｉｎ；最后７２℃延伸１０ｍｉｎ。在此优化条件下得到的ＲＡＰＤ图谱有较好的特异性和重复性，为海带遗传多样性。种质鉴定、分子标记及辅助育种等研究提供了有用的手段。