高水平表达SSU1的酿酒酵母菌构建

摘要

通过构建亚硫酸盐转运蛋白(SSU1)基因重组表达载体,获取能够高效表达SSU1基因的酵母工程菌株。根据酿酒酵母SSU1基因序列设计引物,以提取的酿酒酵母AH109基因组DNA为模板,PCR扩增获得SSU1基因片段,克隆至酵母表达载体JMB440的Bam HⅠ和XhoⅠ位点,然后经过菌落PCR、Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切和DNA测序鉴定,成功构建重组质粒JMB440-SSU1。将重组质粒转化至酿酒酵母AH109,经营养缺陷培养基筛选后获得阳性克隆并发酵培养,通过SDS-PAGE电泳检测SSU1蛋白在重组酵母菌株中的表达。结果表明成功构建了高效表达SSU1的重组酿酒酵母菌株。