体外培养对小鼠囊胚的发育潜能及DNA损伤的影响研究

摘要

目的 研究体外培养对小鼠囊胚的发育潜能及DNA损伤的影响及作用机制.方法 将实验小鼠随机分为两组,自然妊娠组(NC组)和胚胎体外培养组(IVC组),每组各6例雌鼠,收集两组囊胚期胚胎各60枚.荧光实时定量聚合酶链反应检测两组胚胎早期细胞定向分化因子以及DNA损伤相关基因的表达水平,免疫荧光法检测两组囊胚中DNA损伤因子γH2AX的表达水平.结果 实时定量PCR检测结果显示,相比于NC组,IVC组的多能因子Pou5f1、Nanog基因表达显著下降(P＜0.05),滋养层细胞分化基因Tead4表达显著上调(P＜0.05),滋养层细胞分化基因Cdx2、Eomes和Elf5的表达均显著下降(P＜0.05),调控原始外胚层分化的基因Gata6、Sox17、Fgfr2以及Fgfr4表达显著下降(P＜0.05),Lif基因表达也在IVC组显著下降(P＜0.05).免疫荧光检测结果显示,IVC组囊胚DNA损伤因子γH2AX的相对荧光密度显著大于NC组(P＜0.05).同时,与NC组相比,IVC组的DNA损伤相关基因Fas、Gadd45a和Ddit3的表达均显著上升(P＜0.05).结论 体外培养可导致小鼠囊胚多能因子及早期胚胎命运决定基因表达水平发生改变,影响小鼠囊胚发育潜能.这可能与IVC组小鼠囊胚DNA损伤增加、DNA损伤相关基因的表达异常具有潜在联系.