维生素D信号通路在反复种植失败患者子宫内膜组织中作用的机制研究

摘要

目的 探讨维生素D信号通路对反复种植失败(RIF)患者子宫内膜容受性的影响及可能的作用机制。方法 收集2019年5月至2021年2月于海南省妇女儿童医学中心就诊的30例RIF患者为RIF组,选择同期因输卵管和/或男性因素接受IVF-ET治疗,并在子宫内膜活检采集后的移植周期中实现临床妊娠的30例女性作为对照组。分别于自然月经周期黄体生成素高峰后7 d(对照组)或激素替代疗法(HRT)周期服用孕酮后5 d(RIF组)收集两组患者的子宫内膜组织与外周血的血液样本;体外细胞实验选择人子宫内膜间质细胞(hESCs)SCRC-2002细胞系。免疫组织化学染色法检测VD代谢酶CYP27B1和VD受体(VDR)在子宫内膜组织中的表达;利用孕酮(P_(4))与二丁酰环磷酸腺苷(cAMP)联合诱导法使hESCs发生蜕膜化;将携带沉默VDR(sh-VDR)与对照序列(sh-NC)的慢病毒载体转染至hESCs中,并将细胞分为:cAMP+P_(4)+sh-NC组、cAMP+P_(4)+sh-NC+VD组和cAMP+P_(4)+sh-VDR+VD组,RT-PCR检测蜕膜化标志物催乳素(PRL)和胰岛素生长因子结合蛋白(IGFBP1)mRNA表达;P_(4)处理转染后的hESCs,并将细胞分为:sh-NC组、P_(4)+sh-NC组、P_(4)+sh-NC+VD组与P_(4)+sh-VDR+VD组;CCK-8检测细胞的增殖能力;Western blotting检测细胞中上皮细胞标志物β-Catenin、E-cadherin、ZO-1与间质细胞标志物N-cadherin、CLDN5蛋白表达水平。结果 与对照组相比,RIF组子宫内膜组织中CYP27B1和VDR的mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与cAMP+P_(4)+sh-NC组相比,cAMP+P_(4)+sh-NC+VD组中PRL与IGFBP1的mRNA表达显著升高(P<0.05),cAMP+P_(4)+sh-VDR+VD组中PRL与IGFBP1的mRNA表达显著降低(P<0.05)。与sh-NC组相比,P_(4)+sh-NC组、P_(4)+sh-NC+VD组和P_(4)+sh-VDR+VD组细胞的增殖能力显著增强(P<0.05),细胞中β-Catenin、E-cadherin、ZO-1蛋白表达显著增加(P<0.05),N-cadherin、CLDN5蛋白水平显著降低(P<0.05)。与P_(4)+sh-NC组相比,P_(4)+sh-NC+VD组细胞增殖能力与β-Catenin、E-cadherin、ZO-1蛋白表达显著增加(P<0.05),N-cadherin、CLDN5蛋白表达显著降低(P<0.05);P_(4)+sh-VDR+VD组细胞增殖能力与β-Catenin、E-cadherin、ZO-1蛋白表达显著降低(P<0.05),N-cadherin、CLDN5蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 RIF患者子宫内膜组织中VD代谢酶CYP27B1和VDR表达均降低;VD/VDR通路可能通过参与并促进hESCs在卵巢激素作用下的增殖与上皮样变过程,促进细胞的蜕膜化,从而增强子宫内膜的容受性,参与调控胚胎的植入。