弱精子症患者精浆外泌体has-miR345-3p和has-miR424-5p的分析及生物作用的预测

摘要

目的 分析弱精子症患者精浆外泌体微小RNA(miRNAs)差异表达谱,探讨has-miR-345-3p和has-miR-424-5p在弱精子症的作用。方法 收集2021年7—10月就诊于北大国际医院生殖医学科的男性弱精子症(精子活力<40%)患者50例(弱精子症组)及同时期在该院体检中心健康体检的精液参数正常男性50例(对照组)为研究对象,分离留存精浆后,每组随机取10例混为1个混合样本,每组各5个混合样本。采用梯度超速离心的方法分离纯化精浆外泌体,提取总RNA,芯片法分析miRNAs的差异表达谱,采用实时定量PCR(qRT-PCR)验证has-miR-345-3p和has-miR-424-5p,生物信息学技术预测has-miR-345-3p和has-miR-424-5p的生物作用。结果 芯片检测结果表明,与对照组相比,弱精子症组精浆外泌体中共6个miRNAs表达显著上调,2个miRNAs表达显著下调(P均<0.05)。qRT-PCR验证结果显示,弱精子症组精浆外泌体中的has-miR-345-3p表达水平显著高于对照组,has-miR-424-5p表达水平显著低于对照组(P均<0.05)。通过TargetScan数据库分析预测has-miR-345-3p和has-miR-424-5p的靶基因分别为KCNMB1和KCNN4,has-miR-345-3p可与KCNMB1的3’UTR连续5个碱基相匹配,has-miR-424-5p可与KCNN4的3’UTR连续7个碱基相匹配。数据库分析显示KCNMB1和KCNN4属于钾离子通道蛋白,是构成精子离子通道KSper的辅助亚基,与精子活力和男性不育密切相关。结论 弱精子症患者精浆外泌体中has-miR-345-3p表达上调、has-miR-424-5p表达下调,两者可能通过对靶基因的调控影响下游相关蛋白继而影响精子活力,但具体机制有待进一步研究。