circ ANKIB1通过miR-217/DKK1轴调控骨肉瘤恶性生物学行为的机制研究

摘要

目的探讨circ ANKIB1在骨肉瘤中的确切作用和调控机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨肉瘤组织中circ ANKIB1、miR-217和DKK1的表达水平。将质粒si-circ ANKIB1、pcDNA-circ ANKIB1、miR-217 inhibitor、miR-217 mimics、si-DKK1转染至骨肉瘤细胞,分别上调或下调circ ANKIB1、miR-217和DKK1的表达,集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞划痕愈合实验检测细胞迁移能力。Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白水平。通过miRanda或TargetScan预测miR-217与circ ANKIB1或DKK1之间的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因检测证实。结果在骨肉瘤组织中,circ ANKIB1和DKK1高表达,而miR-217低表达。敲低circ ANKIB1通过诱导细胞凋亡抑制细胞增殖、迁移和上皮间质转化,从而抑制骨肉瘤的进展。miR-217是circ ANKIB1的直接靶点,其抑制逆转了circ ANKIB1敲低对骨肉瘤细胞进展的抑制作用,且敲低miR-217促进了骨肉瘤细胞增殖、迁移和上皮间质转化。DKK1是miR-217的直接靶点,在骨肉瘤细胞中发挥促癌作用。此外,circ ANKIB1通过海绵吸收miR-217正向调控DKK1的表达。结论circ ANKIB1的下调通过miR-217/DKK1轴抑制骨肉瘤的进展。