CDK9在动脉粥样硬化组织中的表达及其敲低对血管平滑肌细胞增殖的影响

摘要

目的 研究细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)在动脉粥样硬化(AS)组织中的表达,及其敲低对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及调控机制,并探讨其临床意义.方法 收集我院健康体检者(A组)及冠心病患者(B组)外周血标本各20例,正常颈动脉内膜组织(C组)及颈动脉粥样硬化斑块组织(D组)各6例.选取VSMCs,分为阴性转染组(E组)和CDK9敲低组(F组),其中E组转染CDK9阴性对照(CDK9-NC),F组转染CDK9小干扰RNA(CDK9-siRNA).通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CDK9 mRNA在各组中的表达量以及E、F组中增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达量;采用Western blotting方法 检测E、F组中CDK9、PCNA蛋白的表达量;通过EDU、CCK-8实验检测E、F组细胞的增殖情况.结果 RT-qPCR检测结果 显示,A组与B组、C组与D组中CDK9mRNA的表达量比较,差异有显著性(t=7.94、4.79,P＜0.05).RT-qPCR和Western blotting检测结果 显示,E组和F组中CDK9mRNA和蛋白相对表达量比较,差异有显著性(t=30.33、16.39,P＜0.05);E组和F组中PCNA mRNA和蛋白相对表达量比较,差异有显著性(t=8.14、12.62,P＜0.05).EDU和CCK-8实验结果 显示,E组和F组平均吸光度值、波长450nm处吸光度值比较,差异有显著性(t=13.13、6.78,P＜0.05).结论 CDK9 mRNA在动脉粥样硬化组织中显著升高.在VSMCs中敲低CDK9可显著抑制细胞增殖及PCNA的表达.在AS中,CDK9可能通过影响PCNA的表达而调控VSMCs的增殖.