一种改良的简易灌注分离小鼠肝细胞的方法

摘要

目的探讨一种改良的简易灌注分离小鼠肝细胞的方法。方法采用改良的简易两步灌注法分离小鼠肝细胞,即使用连有头皮针的注射器进行肝门静脉插管并灌流冲洗,再用Ⅳ型胶原酶灌流消化;分离肝细胞后采用室温静止法进行纯化;利用锥虫蓝染色法鉴定细胞存活率;培养板预先用鼠尾胶原铺备,利用倒置显微镜观察细胞形态;细胞贴壁后1～10d检测培养液上清液中的白蛋白的分泌情况,判断肝细胞的生物学活性和功能。结果成功建立了一种简单易行的分离与培养小鼠原代肝细胞的方法。培养的小鼠肝细胞在接种后4h基本完成贴壁,细胞可稳定贴壁至少1周,成活率可达85%以上且功能良好,可用于后续实验。结论改良的简易两步灌注法是一种简单易行、经济高效的分离纯化小鼠肝细胞的方法,适合小鼠肝细胞的分离。