OTUD 3敲除对神经干细胞中缝隙连接蛋白43表达的影响

摘要

目的探讨OTUD 3敲除对神经干细胞(NSCs)中缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法分离提取妊娠第14天时野生型(WT)和OTUD 3^(-/-)胚胎小鼠的脑皮质组织蛋白,同时进行体外培养WT-NSCs和OTUD 3^(-/-)-NSCs,并根据细胞状态传代,传代至第3代时,应用倒置显微镜观察第1、3天时OTUD 3^(-/-)-NSCs和WT-NSCs生长状态。用细胞免疫荧光染色检测WT-NSCs和OTUD 3^(-/-)-NSCs中Ki67、Nestin和β-tubulinⅢ的表达情况,应用Western blotting方法检测WT-NSCs和OTUD 3^(-/-)-NSCs中以及WT和OTUD 3^(-/-)胚胎小鼠脑皮质组织中OTUD3和Cx43表达变化情况。结果培养并传代至第3代的WT-NSCs和OTUD 3^(-/-)-NSCs生长状态良好,细胞免疫荧光染色显示Ki67、Nestin和β-tubulinⅢ染色阳性。与WT-NSCs相比,OTUD 3^(-/-)-NSCs中OTUD3和Cx43表达量显著下调(t=16.82、3.21,P<0.05);与WT胚胎小鼠相比,OTUD 3^(-/-)胚胎小鼠脑皮质组织中OTUD3和Cx43表达量显著下调(t=10.04、20.41,P<0.05)。结论OTUD 3敲除后,NSCs中Cx43表达量显著下调,Cx43可能在促进NSCs的增殖和神经发育过程中发挥调节作用。