一种快速获得纯度较高的内皮祖细胞的方法

摘要

目的:探讨利用密度梯度离心法+差速贴壁法联合特殊培养基诱导法来分离、扩大培养内皮祖细胞(EPCs)。方法:从兔的髂骨处抽取骨髓,利用Percoll淋巴细胞分离液进行高速梯度离心,先利用α-MEM培养液培养单核淋巴细胞层48 h,然后取其上清离心后用EGM-2 Bulletkit培养液进行培养诱导并进行扩增传代。从形态学、特异性荧光染色、细胞表面特异性标志物、体外成管腔以及体内成血管等方面来鉴定细胞以及活性。结果:获得的细胞培养1周即出现典型的铺路石样,细胞表面高度表达造血来源的CD133和VEGFR2标志物。具有同时摄取Dil-ac-LDL及结合FITC-UEA-I的能力。在体外6 h就可形成管腔样并随着时间延长相互连接成脉管样且维持时间长达2周之久;在裸鼠皮下可以形成明显的血管网络结构,且可以迁移至周边组织。结论:建立一种新的可快速获得纯度较高的骨髓来源的内皮祖细胞方法。