METTL3/AMPK通路在七氟烷诱发小鼠认知功能损伤中的作用

摘要

目的探讨m6A甲基转移酶3(METTL3)/AMP活化蛋白激酶(AMPK)通路在七氟烷(SEV)诱发小鼠认知功能损伤中的作用。方法将出生后6 d小鼠随机分为4组(每组8只):Ctrl+sh-NC组、SEV+sh-NC组、Ctrl+sh-METTL3组和SEV+sh-METTL3组。在出生后60~65 d进行Morris水迷宫测试评估空间记忆,然后处死小鼠收集海马组织,通过斑点印迹法分析mRNA m6A甲基化,高尔基染色观察海马DG亚区的树突,免疫印迹分析METTL3、AMPK蛋白表达。体外实验考察METTL3上调对小鼠海马神经元细胞系(HT-22)中m6A水平和AMPK的mRNA稳定性影响。结果暴露于SEV的小鼠海马组织中m6A水平和甲基转移酶METTL3水平显著增加(P<0.05)。与sh-NC+SEV组相比,sh-METTL3+SEV组逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),平台穿越时间和象限时间显著增加(P<0.05),以及DG区树突棘的数量和BDNF、p-AMPK表达均显著增加(P<0.05)。METTL3过表达质粒显著增加了HT-22细胞中的m6A水平(P<0.01),同时降低了BDNF和p-AMPK表达(P<0.05)。METTL3上调显著降低了AMPK mRNA稳定性(P<0.05)。结论METTL3敲低通过m6A介导的AMPK mRNA稳定性的降低减轻了SEV诱导的幼鼠认知功能损伤。