5-HT1A受体介导的cAMP-PKA-CREB信号通路在七氟烷致老年大鼠认知功能影响中的作用

摘要

目的：通过建立七氟烷致SD大鼠新生鼠的认知功能障碍模型，提取海马组织培养神经元细胞，对细胞进行拮抗剂处理，观察海马神经元细胞中5-HT1A受体、PKA、cAMP及CREB的表达，探讨七氟烷对SD大鼠认知功能影响及5-HT1A受体在七氟烷致认知功能障碍中的作用及机理。　　方法：健康SD大鼠新生鼠若干只，经3%的七氟烷处理6小时，经75%的酒精浸泡消毒，断颈取头，无菌操作台内冰上分离海马组织，进行海马神经元细胞培养，将培养好的海马神经元细胞随机分为三组，分别进行空白组、PKA拮抗剂以及5-HT1A受体拮抗剂处理，之后分别在处理的0h、24h、48h及72h进行蛋白质提取后行Western Blot法检测PKA及CREB的表达水平，行Elisa检测cAMP的表达水平，分别在各个时间点提取RNA行Real-time PCR检测5-HT1A受体的表达水平。　　结果：1.体外培养的海马神经元细胞7-10天生长状态达到最佳，大部分突起连接成网，细胞形态典型；经过神经元特异烯醇化酶NSE染色免疫荧光检测示海马神经元细胞胞体突起呈阳性反应，培养7-10天的细胞阳性细胞率≥90%；2.Real-time PCR检测5-HT1A受体的表达水平显示与空白组比较，5-HT1A受体拮抗剂组的5-HT1A受体表达量在0h、24h上调，差异有统计学意义（*P＜0.05），5-HT1A受体拮抗剂组的5-HT1A受体表达量在48h、72h高于空白组，差异无统计学意义（P＞0.05）。PKA拮抗剂组与空白组比较，5-HT1A受体表达量均高于空白组在0h、24h、48h以及72h，差异无统计学意义（P＞0.05）。5-HT1A受体拮抗剂组及PKA拮抗剂组的5-HT1A受体表达量随着添加拮抗剂的时间的延长逐渐上调，差异无统计学差异（P＞0.05）；3.Western Blot法检测PKA及CREB的表达水平实验结果：PKA拮抗剂组及5-HT1A受体拮抗剂组PKA及CREB的表达量在0h、24h、48h、72h四个时点间均高于空白组，差异具有统计学意义（*P＜0.05），PKA拮抗剂组、5-HT1A受体拮抗剂组在添加拮抗剂处理的四个时间点PKA及CREB表达量随时间延长逐渐上调，差异无统计学意义（P＞0.05）；4.Elisa法检测cAMP表达实验结果：组间比较得出，5-HT1A受体拮抗剂组与空白组在0小时、24小时、48小时、72小时四个时点间的差异均具有统计学意义（*P＜0.05），PKA拮抗剂组与空白组在0小时、24小时、48小时、72小时四个时点间的差异没有统计学意义（P＞0.05），5-HT1A受体拮抗剂组cAMP表达量高于空白组；组内比较得出，空白组、PKA拮抗剂组、5-HT1A受体拮抗剂组四个时点间总体无统计学差异（P＞0.05）。　　结论：七氟烷引起SD大鼠认知功能障碍的机制可能与抑制海马中5-HT1A受体介导的cAMP-PKA-CREB信号通路表达有关。

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