人心肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的高效表达及纯化

摘要

目的 :获得高纯度的人心肌肌钙重组蛋白 ,为临床上检测心肌损伤及预后提供新的诊断方法。方法 :利用RT PCR方法从人心肌细胞的cDNA文库中扩增编码人心肌肌钙蛋白Ⅰ的cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,表达含凝血酶识别序列的MS2 cTnI融合蛋白 ,纯化后用Western blot进行鉴定。结果 :从人心肌cDNA文库中扩增出编码人cTnI的cDNA ,克隆并在大肠杆菌中表达 ,表达量达 30 %以上。经离子交换柱纯化 ,最终产物纯度在95 %以上。可与其特异性单克隆抗体反应。结论 :cTnI能够在大肠杆菌中高效表达和纯化 。