2种鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗的构建及在鸡体内的表达

摘要

利用DNA重组技术,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenalla)第2代裂殖子抗原基因MZ5-7 的完整阅读框(ORF,945 bp)克隆到真核表达质粒pcDNA4.0中,构建了DNA疫苗pcDNA4.0-MZ.用同样方法,将鸡成熟白细胞介素-17(IL-17)基因的完整阅读框(507 bp)与MZ5-7基因串连,使MZ5-7基因位于IL-17基因的上游,将串连基因克隆到pcDNA4.0中,构建成免疫调节型DNA疫苗pcDNA4.0-MZ-IL-17.2种DNA疫苗纯化后,胸部肌肉注射免疫1周龄雏鸡(50 μg/鸡),在免疫后3,5,7,15和20 d取注射和非注射部位肌肉组织,分别用RT-PCR和Western blot方法检测抗原基因转录和表达情况.结果表明,在2种疫苗免疫后5,7和15 d, 用RT-PCR方法在注射部位均可检测到MZ5-7基因的转录产物,大小约950 bp,但在免疫第3天和20天的肌肉组织中未检测到表达产物.相同时间用Western blot方法进行检测,结果在免疫5和7 d的鸡肌肉组织中检测到表达产物,pcDNA4.0-MZ表达产物大小约36 ku,与理论推测值一致,pcDNA4.0-MZ-IL-17表达产物大小约64 ku,较MZ5-7和IL-17基因之和的理论推测值58 ku略大.但在非注射部位,两种方法均未检测到转录或表达产物.上述结果表明,通过肌肉注射后,两种DNA疫苗均可在鸡肌肉组织中得到有效表达.