同型半胱氨酸通过干扰胆固醇逆向转运促进巨噬细胞泡沫化

摘要

目的 阐明同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人类急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)源性巨噬细胞泡沫化的影响;探讨肝X受体α(liver X receptor α,LXRα)在同型半胱氨酸所致脂代谢紊乱中的作用.方法 以THP-1为研究对象,先后与佛波酯(phorbool-1-myristate-13-acetate,PMA)、氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)共同培养,成功复制泡沫细胞模型,分别加入50、100、200μmol·L-1的Hcy,培养24h,对照组不加入Hcy.利用油红O染色(oil red O,ORO)检测泡沫细胞中性脂滴蓄积情况;利用酶终点法测定细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)、游离胆固醇(free cholesterol,FC)、胆固醇酯(cholesterolester,CE)的含量,观察Hcy对巨噬细胞内脂质含量的影响;利用免疫细胞化学检测泡沫细胞LXRα蛋白表达,利用实时定量聚合酶链反应(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定LXRα mRNA表达,观察Hcy对巨噬细胞LXRα表达的影响.结果 ORO染色结果显示,与对照组比较,Hcy浓度越高巨噬细胞内胆固醇的聚集越明显;实验组(Hcy 50、100、200μmol·L-1)泡沫细胞计数阳性百分率均较对照组升高(P均＜0.05),其中以Hey l00μmol·L-1组升高明显;在不同浓度Hcy干预下,巨噬细胞内TC、FC及CE含量均高于对照组(P均＜0.05);免疫细胞化学结果显示,实验组LXRα蛋白表达均低于对照组(P均＜0.05),其中以Hcy 100μmol·L-1组降低最为明显;RT-PCR结果显示,与对照组比较,实验组LXRα mRNA表达下调(P＜0.05).结论 同型半胱氨酸能够引起THP-1源性巨噬细胞泡沫化程度增加,使LXRαmRNA低表达导致胆固醇逆向转运障碍是其引起脂代谢紊乱的可能机制之一.