Wnt5a对中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响

摘要

目的:探讨Wnt5a对中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular trap,NET)形成的影响及可能的调控机制.方法:采用50 ng/mL Wnt5a刺激人中性粒细胞3 h,以1 μg/mL牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(li-popolysaccharide,LPS)和1 μg/mL大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS作为阳性对照,采用免疫荧光技术观察NET的形成,Sy-tox Green荧光法对胞外DNA进行定量,采用流式细胞术检测细胞产生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot分析信号分子磷脂酰肌醇三激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/Akt和丝裂原活化蛋白激酶1/2(mitogen-activated protein kinase1/2,MEK1/2)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases1/2,ERK1/2)表达水平的变化.结果:Wnt5a刺激人中性粒细胞后,可观察到NET的形成和胞外DNA数量的增加(P＜0.05),ROS水平较刺激前明显增高(P＜0.05),Western blot检测显示,PI3K/Akt和MEK1/2、RK1/2磷酸化水平增高(P＜0.05).结论:Wnt5a可能通过PI3K/Akt、MEK1/2、ERK1/2磷酸化,调控ROS生成,进而促进人中性粒细胞形成NET.