miR-148a／b真核表达质粒的构建及其在胰腺癌细胞系中的表达

摘要

目的构建miR-148a／b真核表达质粒，转染胰腺癌AsPC-1细胞，并观察其miR-148a／b的表达水平。方法根据miRBase提供的序列合成miR-148a／b前体，PCR扩增后形成双链，插入线性化真核表达质粒pcDNA3．1，构建pcDNA3．1／miR-148a／b，进行酶切和测序鉴定。将胰腺癌AsPC-1细胞分4组进行质粒转染：转染pcDNA3．1／miR-148a（miR-148a组）、转染pcDNA3．1／miR-148b（miR-148b组）、转染pcDNA3．1（空质粒对照组）和仅加脂质体（空白对照组）。转染48h后，采用定量PCR法检测各组细胞中miR-148a／b的表达量。结果pcDNA3．1／miR-148a／b的酶切和测序与miRBase提供的序列完全一致。转染48h后，miR-148a组AsPC-1细胞中的miR-148a表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（6．76±0．35比1．00±0．54、1．02±0．40，均P〈0．05），miR-148b组AsPCq细胞中的miR-148b表达量明显高于空质粒对照组和空白对照组（3．28±0．08比1．02±0．35、1．01±0．28，均P〈0．05）。结论成功构建了miR-148a／b真核表达质粒pcDNA3．1／miR-148a／b，该质粒能显著上调胰腺癌AsPC-1细胞的miR-148a／b表达水平。