应用基因密码子优化技术建立高效人降钙素原的原核表达方法及产品纯化和鉴定

摘要

目的建立人降钙素原(procalcitonin,PCT)表达体系,高效表达可溶性PCT蛋白。方法合成PCT蛋白密码子优化序列,克隆至带麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)标签的pRSF-Duet载体以构建pMBP-PCT-pRSF原核表达质粒。在E.coli BL21(DE3)pLysS菌株中诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE)鉴定蛋白分子量及纯度,生物梅里埃VIDAS全自动荧光免疫分析仪检测蛋白浓度、稳定性及均匀性。结果pMBP-PCT-pRSF质粒成功构建及表达,浓度达168(168.00±2.65)mg/L,纯度达95%。在4℃及-20℃储存,PCT蛋白具有良好的稳定性(F=2.016,2.620,均P>0.05)和均匀性(F=0.7273,0.9739,均P>0.05)。结论利用密码子优化,成功构建可溶性PCT蛋白的高效原核表达体系,可充分满足临床实验室参考物质的需求。