miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖抑制及克隆形成的机制研究

摘要

目的检测骨肉瘤组织中miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖、克隆形成的影响及潜在分子作用机制。方法选取2018年1月~2020年12月内蒙古自治区巴彦淖尔市医院病理科30组临床骨肉瘤组织及邻近正常组织标本,采用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)法检测组织中miR-146b-5p表达水平;通过介导转染miR-146b-5p mimics和miR-146b-5p ASO分别过表达和敲低miR-146b-5p表达,探究其对骨肉瘤细胞增殖及克隆形成的影响。通过生物学信息数据库预测miR-146b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验验证两者结合关系,分析miR-146b-5p对靶基因的调控作用。分析靶基因在骨肉瘤中的表达特征及与miR-146b-5p的相关性,通过细胞增殖实验验证两者的调控作用,以其探究在骨肉瘤中发挥功能的潜在分子机制。结果骨肉瘤组织中miR-146b-5p表达(4.096±1.237)显著低于邻近正常组织(5.895±0.834),差异有统计学意义(t=6.605,P<0.001)。miR-146b-5p过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力(t=13.233~34.599,均P<0.01)。miR-146b-5p过表达组克隆形成数目(48.912±2.032)较对照组(160.834±9.031)明显降低,差异有统计学意义(t=20.942,P<0.001)。DUSP16是miR-146b-5p的潜在靶基因,miR-146b-5p负向调控双特异性磷酸酶(dual specificity phosphatase 16,DUSP16)表达。骨肉瘤组织中DUSP16表达(5.683±0.457)较邻近正常组织(4.665±0.531)显著升高,差异有统计学意义(t=7.959,P<0.001),与miR-146b-5p表达呈负相关(r=-0.667,P<0.05)。共转染过表达DUSP16逆转了miR-146b-5p对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。miR-146b-5p过表达组P21水平(4.995±0.214)较对照组(1.001±0.002)显著升高,差异有统计学意义(t=32.325,P<0.001);当共转染DUSP16过表达后,P21表达(0.986±0.012)较单独过表达miR-146b-5p组(4.995±0.214)显著降低,差异有统计学意义(t=32.398,P<0.001)。结论骨肉瘤组织中miR-146b-5p显著低表达,其过表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖及克隆形成;miR-146b-5p通过靶向负调控DUSP16表达参与P53信号通路从而在骨肉瘤发生发展起重要作用。