解脲支原体Ⅰ型MB抗原主蛋白氮端基因的克隆及原核表达

摘要

目的从新鲜培养的解脲支原体(URA)Ⅰ型培养液获得其MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因,并体外表达,获得具有抗原活性的原核表达蛋白,为研制广谱、低廉及方便准确的URA感染的诊断及治疗方法提供物质基础.方法从新鲜培养的URA标准株Ⅰ型培养液提取DNA模板,采用特异引物及聚合酶链方法获得其MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因,经克隆入测序载体验证DNA大小及序列后,将MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因克隆入高效原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,初步以Western-blot测定表达产物的抗原性即与感染者阳性血清的反应活性.结果以笔者设计的特异引物,能得到预期大小的PCR产物,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列符合目的基因的序列,其插入原核表达载体能获得表达,且表达产物具有抗原活性,能与感染患者的血清发生抗原抗体反应.结论所得到的MB抗原主蛋白N端1/3保守区片段的基因,与GENE BANK检索序列一致.在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物,有抗原活性,有望用于URA抗体检测及疫苗研制.