miR-200b-3p/NBR1轴对乳腺癌细胞自噬及生长的影响

摘要

目的miR-200b-3P靶向NBR1调控乳腺癌自噬的作用仍未完全探索,文章旨在探讨miR-200b-3p是否靶向NBR1影响乳腺癌细胞自噬及生长。方法介绍些分组选择人乳腺癌细胞(MDA-MB-453)为研究对象,分为阴性对照组(转染mimic NC或inhibitor NC)、miR-20Ob-3p mimic组(转染miR-200b-3p模拟物)、miR-200b-3p inhibitor组(转染miR-200b-3p抑制剂),采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Tmnswell实验检测细胞侵袭能力;透射电镜观察细胞超微结构;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-200b-3p mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Beclin-1、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ、NBR1蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-200b-3p与NBR1之间的靶向关系。结果qRT-PCR检测结果显示,与mimic NC组(1.000±0.069)比较,miR-200b-3p mimic组miR-200b-3p mRNA表达(1.314±0.093)明显升高;与inhibitor NC组(1.009±0.055)比较,miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p mRNA表达(0.581±0.031)明显降低(P<0.05);与miR-200b-3p mimic组比较,miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p mRNA表达明显降低(P<0.05)。细胞侵袭结果显示,与mimic NC组比较,miR-200b-3p mimic组穿过基膜的细胞数明显降低(P<0.01),与inhibitor NC组比较,miR-200b-3p in-hibitor组穿过基膜的细胞数明显升高(P<0.0l),与miR-200b-3p mimic组比较,miR-200b-3p inhibitor组穿过基膜的细胞数明显升高(P<0.05)。细胞周期阻滞结果显示,与mimic NC组比较,miR-200h-3p mimic组细胞在G2/M期、S期均明显减少,G1/G0期细胞均明显增多,与inhibitor NC组比较,miR-200b-3p inhihitor组细胞在G2/M期、S期均明显增多(P<0.05),G1/G0期细胞均明显减少(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,与mimic NC组比较,miR-200b-3p mimic组细胞中Beclin-1、LC3II/I蛋白水平明显升高,P62蛋白表达明显降低(P<0.01),与inhibitor NC组比较,miR-20Ob-3p inhibitor组细胞中Beclin-1、LC3II/I蛋白水平明显降低,P62蛋白表达明显升高(P<0.01)。Weatem blot检测结果显示NBR1蛋白表达于转染miR-200b-3p mimic后明显降低,转染miR-200b-3p inhibitor后明显升高(P<0.01)。结论miR-200b-3p mimic可能通过靶向NBR1表达抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡及自噬。