杜仲苷对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

摘要

目的 杜仲苷影响软骨细胞增殖和凋亡的分子机制尚未完全清楚.文中旨在研究杜仲苷对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及分子机制.方法 取对数生长期软骨细胞,分别用终浓度为10、100、500、1000 μmol/L的杜仲苷处理,分别为杜仲苷10 μmol/L组、杜仲苷100 μmol/L组、杜仲苷500 μmol/L组、杜仲苷1000 μmol/L组,对照组为正常培养的细胞.检测不同浓度杜仲苷对骨关节炎软骨细胞增殖的影响,并选出最佳杜仲苷浓度作后续实验,为杜仲苷组.取对数生长期软骨细胞,无血清重悬后进行转染,分为pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-Prdx5组(转染pcDNA-Prdx5 mimics)、杜仲苷+si-NC组(转染si-NC后用500 μmol/L杜仲苷处理)、杜仲苷+si-Prdx5组(转染si-Prdx5后用500 μmol/L杜仲苷处理).qRT-PCR检测骨关节炎软骨细胞中Prdx5 mRNA的表达水平;Western blot检测Prdx5蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,随着杜仲苷浓度的升高,骨关节炎软骨细胞的活性逐渐升高(P＜0.05),选用500 μmol/L杜仲苷作后续实验.流式细胞仪检测结果显示,杜仲苷组骨关节炎软骨细胞的凋亡率[(7.89±1.03)％]较对照组[(18.76±1.24)％]显著降低(P＜0.05).qRT-PCR和Western blot检测结果显示,与对照组比较,杜仲苷组Bcl-2、Prdx5的mRNA和蛋白表达水平显著升高,Bax mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P＜0.05).pcDNA-Prdx5组Prdx5蛋白的表达水平、骨关节炎软骨细胞的活性显著高于pcDNA组(P＜0.05),骨关节炎软骨细胞的凋亡率显著低于pcDNA组(P＜0.05).与杜仲苷+si-NC组Prdx5蛋白的表达水平比较,杜仲苷+si-Prdx5组显著降低(P＜0.05).CCK-8法检测结果显示,与对照组骨关节炎软骨细胞的活性比较,杜仲苷组显著升高(P＜0.05);与杜仲苷+si-NC组骨关节炎软骨细胞的活性比较,杜仲苷+si-Prdx5组显著降低(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,与对照组骨关节炎软骨细胞的凋亡率比较,杜仲苷组显著降低(P＜0.05);与杜仲苷+si-NC组骨关节炎软骨细胞的凋亡率比较,杜仲苷+si-Prdx5组显著升高(P＜0.05).结论 杜仲苷可能通过上调Prdx5促进骨关节炎软骨细胞增殖,抑制其凋亡.