URI基因沉默对乳腺癌细胞自噬与凋亡的影响

摘要

目的URI基因作为癌基因在乳腺癌的发病机制中研究较少。文中旨在探究癌基因URI沉默后对乳腺癌细胞自噬和凋亡的影响。方法利用RNA干扰(RNAi)技术,抑制URI基因在乳腺癌细胞中的表达。针对人乳腺癌细胞URI的cDNA序列设计,合成3对核苷酸序列siRNAs(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),从3对序列中筛选最有效的干扰序列。分为空白对照组(不添加任何转染试剂)、NC-siRNA组(阴性对照FAM-NC-siRNA)、siRNA-URI组(URI基因沉默)。RT-PCR检测自噬相关基因LC3、P62、Beclin1、ATG12和凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3的转录水平,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平,激光共聚焦显微镜检测自噬小体数量的变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果确定50 nmol/L为siRNA的最佳转染浓度,siRNA-3为最佳干扰序列。siRNA-URI组自噬相关基因LC3、Beclin1及ATG12的mRNA表达水平明显低于NC-siRNA组(P<0.05),P62的mRNA表达水平(2.123±0.277)明显高于NC-siRNA组(1.000±0.228),差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-URI组抗凋亡基因Bcl-2的mRNA表达水平明显低于NC-siRNA组(P<0.01);促凋亡基因Bax、Caspase-3的mRNA表达水平明显高于NC-siRNA组(P<0.01)。未用H_(2)O_(2)诱导凋亡发生时,siRNA-URI组Bcl-2蛋白表达量较NC-siRNA组明显降低,Bax和Caspase-3蛋白表达量明显升高;siRNA-URI组与NC-siRNA组几乎不表达Cleaved Caspase-3蛋白;用250μmol/L H_(2)O_(2)作用于细胞24 h诱导凋亡发生时,siRNA-URI组Bcl-2蛋白表达量较NC-siRNA组显著降低,Bax和Caspase-3蛋白表达量显著升高;两组均表达了Cleaved Caspase-3蛋白,且siRNA-URI组Cleaved Caspase-3蛋白表达量较NC-siRNA组显著升高。结论URI基因沉默可导致乳腺癌细胞自噬减弱和凋亡增强,为探究乳腺癌的治疗手段提供了实验依据。