肝癌细胞外泌体的摄取与作用研究

摘要

目的目前不同类型细胞对同一种外泌体摄取差异性比较的报道尚不多见,为进一步明确肝癌细胞外泌体的信息转运机制和生物学功能,文中旨在通过研究不同类型细胞对肝癌外泌体摄取的差异,探讨肝癌外泌体对不同肿瘤细胞增殖的影响和对肝细胞的影响。方法用超高速离心法提取肝癌外泌体并通过透射电镜、BCA、Western blot验证;利用共聚焦显微镜观察不同细胞对肝癌外泌体的摄取情况。应用CCK8检测肝癌外泌体对不同肿瘤细胞增殖的影响;外泌体共培养组:与HepG2外泌体共培养后的肝细胞(hep_ev),取30μg外泌体与1×106个肝细胞共培养48 h;对照组:加入等体积PBS的肝细胞(hep),运用非标记定量蛋白质谱检测样本肝癌相关蛋白表达水平;应用蛋白质谱分析肝癌细胞外泌体对肝细胞的作用。结果示踪结果显示,HepG2细胞和SMMC7721细胞内的荧光信号较强;K562细胞中可观察到荧光信号(148.50±8.50),较HepG2和SMMC7721(206.76±3.93、214.02±2.45)弱;红细胞内无荧光信号。外泌体共培养组、对照组对HepG2细胞、SMMC7721细胞、K562细胞的增殖无明显差异(P>0.05)。与肝癌外泌体共培养后的肝细胞有42种蛋白表达存在差异,其中27种蛋白表达上调,15种蛋白表达下调,PPIA、PSMA1、PARK7、PNP、UBA1、CYCS、TXNRD2、USP5等差异蛋白与肝癌发生发展有关;TPI1、ALDH1B1和糖酵解有关。GO分析提示上调蛋白的细胞定位包括细胞外囊泡、细胞外部分、囊泡等。生物学过程主要包括有机氮化合物代谢过程、有机酸代谢过程、小分子代谢过程、药物代谢过程、对化学物质的反应等。KEGG通路分析提示差异蛋白主要参与代谢途径、氨基酸合成、糖酵解途径、蛋白酶体等。结论不同类型细胞对肝癌外泌体的摄取存在差异;肝癌外泌体可影响肝细胞的代谢及其肝癌相关蛋白表达水平。