胃癌MKN-45细胞系的无血清培养技术及干细胞的制备

摘要

目的胃癌干细胞的制备困难一直是阻碍胃癌研究进展的主要因素。文中研究无血清培养基悬浮培养胃癌MKN-45细胞系技术,并根据胃癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)的生物学标记筛选出该细胞系中的干细胞。方法 MKN-45细胞系在无血清培养基中培养8周后,取对数生长期的MKN-45细胞以Hoechst33342孵育后流式细胞仪(FACS)检测侧群细胞。当侧群细胞达约25%时,收集全部细胞微球体,加荧光标记的CD133和CD44单抗孵育后FACS筛选,选CDl33^+CD44^+细胞即为胃癌干细胞。结果胃癌MKN-45细胞系中约40%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖并形成自由飘浮的细胞球。双苯酰胺33342染色检测提示MKN-45细胞中侧群细胞含量为3.4%,而细胞球中侧群细胞细胞含量则明显增高,可达到26.9%;收集的侧群细胞通过FACS检测表面标记,MKN-45细胞CDl33^+CD44^+细胞含量为11.2%,而细胞球中CD133^+CD44^+细胞含量为90.3%。结论应用无血清培养基悬浮培养法能成功获得CSCs富集的肿瘤球,Hoechst33342及表面标记双重检测提取法可筛选出其中的CSCs,并可作为今后胃癌干细胞研究的实验基础。