T4噬菌体32蛋白的表达、纯化及鉴定

摘要

目的构建T4噬菌体32蛋白的原核表达质粒T4—32-pET28b，并表达、纯化和鉴定重组目的蛋白。方法以T4噬菌体DNA基因组为模板，PCR扩增得到32蛋白基因片段，定向克隆到原核表达载体pET28b中，转化入大肠埃希菌BL21（DE3）中，用IPTG诱导表达目的蛋白，然后进行镍柱纯化和G-25脱盐，获得纯化目的蛋白，并进行核酸酶和细菌基因组污染检测及结合DNA单链能力检测。结果构建的T4-32-pET28b质粒经酶切及测序鉴定正确，在BL21（DE3）成功表达了T4-32蛋白，经镍柱和脱盐纯化获得了高纯度的目的蛋白。结论成功构建了T4噬菌体32蛋白的原核表达载体T4—32-pET28b，并实现高表达和纯化了目的表达产物。