共转染CDK1、CDK2siRNA对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响

摘要

目的研究共转染CDK1、CDK2siRNA同时抑制CDKI、CDK2蛋白表达对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响，探讨细胞周期主要调控分子在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法以人宫颈癌细胞株HeLa细胞为研究对象，用脂质体lipofectamine2000同时转染CDKl和CDK2siRNA。在转染后48、60h收集细胞，用Western印迹检测CDKl、CDK2蛋白的表达，AnnexinV／PI检测转染细胞的凋亡，流式细胞术DNA含量检测分析细胞周期。转染细胞进行瑞氏一姬姆萨染色（Wright—Giemsa）后在显微镜下观察其形态变化i结果共转染CDKl、CDK2siRNA后48和60h，Western印迹结果显示CDKl和CDK2蛋白的表达都同时降低。共转染CDKl、CDK2siRNA后，细胞周期S期和G1／M期比例与对照相比有明显增加；共转染细胞经瑞氏一姬姆萨染色后在显微镜下可见双核或多核细胞增多；AnnexinV／PI检测结果显示共转染CDK1、CDK2siRNA的细胞在48和60h细胞凋亡率与对照相比有显著的升高。结论siRNA干扰导致的CDKI、CDK2表达同时降低不仅导致细胞周期s期和G1／M期的阻滞，也诱导了肿瘤细胞的凋亡。