特异性siRNA体外抑制HDGF基因对人大肠癌细胞凋亡的影响

摘要

目的：了解HDGF基因在体外是否对大肠癌细胞凋亡具有调控作用。方法设计特异性小干扰RNA抑制HDGF基因表达，本试验分为3组：空白对照组、非特异性siRNA转染的阴性对照组及HDGF特异性siRNA干扰组。通过AnnexinV-FITC流式双染， Hoechst 33258荧光染色等方法检测转染前后细胞凋亡变化，运用免疫印迹法检测转染HDGF-siRNA前后相关凋亡蛋白的变化情况。结果与2个对照组相比， HDGF-siRNA处理组细胞早期凋亡率明显上升至（14．1±1．24）％，差异具有统计学意义（P＜0．05），在形态学上有20％的细胞出现染色质浓染的凋亡小体，而对照组基本未见；此外与2个对照组相比， HDGF-siRNA处理组细胞中bcl-2及Survivin蛋白含量均有明显下调，而Bax明显上调、 Cyt-c从线粒体释放到胞浆、 caspase-9及caspase-3被激活。结论 HDGF-siRNA能在体外有效诱导大肠癌胞发生凋亡，线粒体凋亡途径在HDGF基因介导的凋亡调控中起重要作用，这暗示HDGF将可能成为大肠癌基因治疗的一个极佳的分子靶点。