GTP结合蛋白4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

摘要

目的:为了建立GTPBP4基因沉默的人结肠癌细胞株,研究GTPBP4基因对人结肠癌细胞株RKO细胞增殖和凋亡的影响,构建并鉴定GTPBP4基因RNA干扰慢病毒载体。方法:针对GTPBP4 mRNA设计siRNA,构建pGCSIL-GFPGTPBP4慢病毒载体,感染293T细胞,包装产生慢病毒,并进行滴度测定。将慢病毒转染人结肠癌细胞株RKO,通过Realtime PCR和Western Blot分析GTPBP4基因敲减效率。结果:结果显示,插入DNA序列与目的基因序列一致,提示插入人GTPBP4基因序列正确。293T细胞中病毒滴度的测定结果 2×108 TU/m L。经siRNA慢病毒感染后,实验组RKO GTPBP4基因mRNA水平表达量受到显著抑制,Western Blot结果显示敲减效率达到72.9%。结论:GTPBP4基因RNAi慢病毒载体构建成功,可用于结肠癌生物行为等各方面的研究。