Ac-SDKP抑制SiO2介导的肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞向间质转化的作用及机制

摘要

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)通过调控刺猬(hedgehog,HH)信号通路,对二氧化硅(SiO2)诱导的肺泡II型上皮MLE-12细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。方法体外采用50μg/mL SiO2培养小鼠MLE-12肺泡Ⅱ型上皮细胞。实验分组为:(1)对照组、SiO2诱导组、Ac-SDKP组和SiO2+Ac-SDKP组;(2)溶剂对照组、SiO2诱导组、GDC-0449组和SiO2+GDC-0449组;(3)溶剂对照组、SiO2诱导组、GANT61组和SiO2+GAN61组。免疫细胞化学染色法检测SMO和Gli1的定位表达。免疫印迹法检测I型胶原蛋白(collagen type I,Col I)、α-SMA、E-cadherin、SHH、Smoothened(SMO)、胶质瘤相关癌基因同源蛋白(glioma-associated oncogene homolog,Gli)1、Gli2的蛋白表达水平。结果免疫细胞化学染色结果显示:与对照组相比,SiO2诱导组中SMO及Gli 1强阳性表达,给予Ac-SDKP处理后,阳性表达减弱。与SiO2诱导组相比较,SiO2+GDC-0449组和SiO2+GAN61组E-cadherin蛋白表达上调,Col I和α-SMA蛋白表达水平下调。与对照组相比较,SiO2诱导组E-cadherin表达水平显著下调,Col I、α-SMA、SHH、SMO、Gli1和Gli2蛋白表达水平显著上调;SiO2+Ac-SDKP组与SiO2诱导组相比较,E-cadherin表达水平显著上调,Col I、α-SMA、SHH、SMO、Gli1和Gli2蛋白表达水平显著下调,经方差分析差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论Ac-SDKP能够通过对HH信号的调节,抑制肺泡II型上皮细胞EMT进程,发挥抗矽肺纤维化的作用。