小鼠Pem-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达

摘要

目的:为制备重组小鼠Pem(以下简称mPem)-谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白,作为研究mPem蛋白功能的材料.方法:根据携带小鼠Pem基因编码序列的模板质粒pEGFP/mPem设计合成特异性引物,PCR扩增小鼠Pem基因编码序列,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-3中,得到重组表达质粒pGEX-4T-3/mPem,用此重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导重组菌表达mPem蛋白,SDS-PAGE及Western Blot鉴定表达产物.结果:重组菌株明显诱导表达出预期相对分子质量49 000的融合蛋白.结论:成功构建了mPem-GST原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出mPem-GST融合蛋白,为mPem蛋白功能的研究打下了基础.