毛霉Amylomyces.rouxii HN0512中内切葡聚糖酶的诱导、纯化及性质分析

摘要

Amylomyces.rouxii HN0512经羧甲基纤维素钠(CMC-Na)诱导,可产内切葡聚糖酶,通过正交试验优化诱导培养基,结果在培养基为1%羧甲基纤维素钠、2%麸皮汁、0.2%蛋白胨(以上均为质量分数)时可以诱导出较高活性的酶,用HiTrap QFF阴离子交换层析从培养液上清中纯化得到了具有内切葡聚糖酶活性的P3组分,活性组份的SDS-PAGE分析电泳呈现一条带,经AlphaEaseFCTM软件预测P3的分子质量为18.7 ku;酶反应的最适温度和pH分别为60℃和5.0,在pH 4.0-7.0范围内稳定性最好,在70℃还能保持50%以上的酶活力;金属离子Fe3+、Ba2+、Fe2+和表面活性剂尿素对酶起到了激活作用;反应动力学参数Km和Vmax分别为11.68 mg.mL-1、0.56μmol.L-1.min-1.本研究获得了一株产内切葡聚糖酶新菌种,并为进一步用基因工程方法克隆并构建重组内切葡聚糖酶基因工程菌奠定了重要的基础.